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                                                                肉蓯蓉多糖的免疫調節活性及吸收特性研究

                                                                 
                                                                【摘要】: 目的通過考察肉蓯蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)對小鼠脾淋巴細胞增殖及巨噬細胞活化的作用,研究肉蓯蓉多糖的免疫調節藥理學活性,并通過不同角度和層次對其吸收特性進行研究。 方法MTT法檢測小鼠脾淋巴細胞的增殖。環磷酰胺(cyclophosphamide CTX)復制免疫功能低下的動物模型,分別測定正常及免疫低下動物脾臟、胸腺指數。胸腺細胞增殖法測定白細胞介素-2(IL-2)活性。 采用中性紅法測定小鼠腹腔巨噬細胞吞噬活性;Griess試劑法測定NO釋放量;L929細胞法及小鼠胸腺細胞法測定TNF-α及IL-1釋放。碳粒廓清法測定小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能。 在建立的Caco-2單層細胞模型上通過測定每孔電阻值(R_(true tissue),比較膜兩側堿性磷酸酶(ALP)活性,確定Caco-2細胞單層的可靠性。測定CDPS經Caco-2單層細胞模型A→B 3h轉運后受側濃度,計算其藥效P_(app)值,從體外模型判斷CDPS的吸收特性;經體外和體內口服給藥藥效比較及口服給藥途徑和腹腔注射給藥途徑藥效的比較從不同角度對肉蓯蓉多糖口服吸收特性進行判斷。 結果CDPS在劑量達7.8mg/L時可促進絲裂原(ConA及LPS)活化淋巴細胞增殖及IL-2的分泌,對未活化淋巴細胞劑量需達25mg/L時加藥組與對照組吸光度值才有顯著性差異。腹腔給藥顯示CDPS(125mg/kg)可明顯提高正常及免疫低下小鼠的脾指數,對因CTX所致胸腺指數的降低也有顯著地對抗作用。 CDPS在6.25~50mg/L劑量范圍內可劑量依賴性地增強BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅能力和促進NO釋放;在2.8~100mg/L劑量范圍內可使正常和免疫抑制的RAW264.7細胞NO釋放明顯增加;在0.56~7.2mg/L或3.6~10mg/L范圍促進RAW264.7細胞TNF-α或IL-1產生,均具有良好的量效關系。CDPS可在一定程度上提高CTX致免疫功能低下小鼠碳粒廓清指數K。 R_(true tissue)值在細胞單層形成過程中穩定增長,細胞模型兩側培養液中ALP活性差異逐步加大,表明建立的Caco-2細胞模型在完整性、細胞極性方面符合藥物吸收特性研究的要求,CDPS過Caco-2細胞模型求得P_(app)值為9.41×10~(-8)cm/s<10×10~(-6)cm/s;對于相同或相關藥效指標,CDPS顯示出體外及腹腔給藥有效,而口服(體內)無效的特征。 結論CDPS明顯促進小鼠脾淋巴細胞增殖,提高正常及免疫抑制小鼠的脾指數,該作用可能與其促IL-2分泌有關。CDPS可顯著提高巨噬細胞吞噬及分泌功能,活化巨噬細胞。顯示CDPS是肉蓯蓉免疫調節的主要物質基礎。但口服吸收不良,因此臨床應綜合權衡,選擇適合的給藥方式,以達最佳療效。
                                                                【關鍵詞】:肉蓯蓉多糖 淋巴細胞增殖 巨噬細胞活化 口服吸收 Caco-2 細胞模型
                                                                【學位授予單位】:中國協和醫科大學
                                                                【學位級別】:碩士
                                                                【學位授予年份】:2009
                                                                【分類號】:R285.5
                                                                【DOI】:CNKI:CDMD:2.2010.015582
                                                                《中國協和醫科大學》 2009年

                                                                 

                                                                 

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